基层医院梅毒螺旋体抗体筛查方法比较及筛查流程探讨

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【摘要】目的：探讨基层医院梅毒螺旋检测的筛查方法及流程。 方法： 对9169份标本分别应用酶联免疫方法，胶乳凝集方法，血浆反应素卡试验进行梅毒螺旋体特异性抗体和非特异性抗体的检测，其结果与梅毒螺旋体抗体颗粒凝集试验确证方法的结果相比较。结果：9169份标本中，ELISA 方法检测出的83例阳性标本经TPPA确证后79例阳性占9518%；胶乳快速法检测出的96例阳性标本经TPPA确证76例阳性占7917%；两种方法双阳性的77例标本经TPPA确证76例为阳性占9870%。 RPR法检测到37份阳性标本，经TPPA确证34份阳性占9189%。初筛ELISA，胶乳快速法，RPR三种方法均阳性的34例，与经TPPA确证均为阳性为100%。 结论： 对于基层医院可以用ELISA方法进行筛查，用胶乳法复检，并用RPR法做传染性的检测，适当改进筛查流程确保梅毒螺旋体的检查。

【关键词】梅毒螺旋体抗体；基层医院；筛查流程

【中图分类号】R 7591【文献标志码】A

梅毒是一种系统性性传播疾病，其病原体是苍白螺旋体（treponemia pallidum，TP）。除性传播途径外，还可经血或母婴垂直传播。据世界卫生组织估计，全球每年新增梅毒感染病例1200万[1]，近年我国梅毒发病也呈上升趋势：1993年每100万人梅毒总发病数不到2例，而2005年每100万人中仅一期二期梅毒发病人数就可达57例[2]。我国卫生部2011年全国法定报告的梅毒发病率和死亡率分别比2010年增长了971%和769%[3]。2010年《新英格兰医学杂志》报道，中国不到一小时就增加一例先天性梅毒患者[4]。梅毒目前已经居乙类传染病的第三位[5]。我院也在2006年就对医院连续三年梅毒筛查阳性例数呈上升趋势的情况做过总结[6]。这些研究报道已经清楚的表明，梅毒防控形势十分严峻。

早期梅毒和隐性梅毒[7]（潜伏梅毒）可无临床症状[8]，因此梅毒感染以实验室诊断为主，同时因为苍白螺旋体不能做体外培养，所以血清学为主要检测方法[9]。目前在各基层医院除了皮肤性病科等专科外，常规手术、输血、内窥镜检查等术前患者通常都进行梅毒血清学筛查。因为存在医疗安全问题和社会问题，梅毒准确检出具有重要意义。本研究对2013年1至12月北京中医药大学东直门医院东区门诊、住院患者中进行了梅毒血清学筛查的9169份标本结果进行了分析。

1材料与方法

11材料

111标本来源收集2013年全年本院门诊及住院患者进行梅毒血清学筛查的血清标本9169份，其中男性4154例，年龄10～92岁，平均486岁；女性5015例，年龄14～102岁，平均463岁。

112试剂与仪器BIO-RAD的EVOLIS全自动酶标仪，宇力TL-2000A型水平旋转仪。试剂为北京万泰生物药业有限公司生产的梅毒螺旋体抗体试剂盒；日本富士瑞必欧株式会社生产的梅毒螺旋体抗体颗粒凝集试验（treponema pallidum particle agglutination，TPPA）；上海科华生物技术有限公司生产的血浆反应素卡（rapid plasma regain card test，RPR）。艾康生物技术（杭州）有限公司生产的梅毒抗体检测试剂盒（免疫层析分析技术胶乳法）。

12方法

121梅毒螺旋体抗体初筛将9169份进行梅毒螺旋体抗体初筛的血清标本在EVOLIS上进行酶联免疫吸附方法（ELISA）的梅毒螺旋体抗体初筛，同时进行胶乳法梅毒抗体的快速检测以及血浆反应素卡（RPR）的梅毒螺旋体非特异的抗体筛查。阳性结果的判定依据试剂说明书。

122梅毒螺旋体抗体复检三种方法中任意一种方法检测阳性的标本进行梅毒螺旋体抗体颗粒凝集试验（TPPA）的确证实验。

2结果

21梅毒螺旋体抗体检测结果

初筛结果：血清进行ELISA方法的梅毒特异性抗体检测中阳性83例；血清进行胶乳法梅毒血清特异性抗体快速检测中阳性96例；血清进行梅毒螺旋体非特异性抗体检测RPR中阳性37例。见表1。

复检结果：初筛三种方法任意一种检测结果为阳性的标本我们进行TPPA 的确证实验，共检测106份标本，阳性79例。见表2。ELISA 方法的S/CO 值与TPPA 确证实验结果对照如表3。

22综合判定结果

ELISA方法检测的83例阳性标本，经TPPA确证后79例阳性（9518%）；胶乳法96例阳性标本中经TPPA确证76例阳性（7917%）；两种方法双阳性的77例标本经TPPA确证均为阳性76例（9870%）。见表2。

RPR检测的37份阳性标本中，经TPPA确证34份阳性（9189%）。初筛ELISA、胶乳快速法、RPR三种方法均阳性的34例，与经TPPA确证34份阳性重合（100%）。见表2。

3讨论

血清学检测梅毒螺旋体抗体主要有两类方法，即梅毒螺旋体非特异性抗体试验和梅毒螺旋体特异性抗体试验。前者以心磷脂、胆固醇、卵磷脂作为抗原，我院以RPR法代表此类方法。该方法操作简便、快速，成本低，适于基层医院应用和人群调查[10]。此方法缺点是反映不出既往感染，并受其它疾病影响较大，易产生假阳性结果。后者以梅毒螺旋体或其特异性肽段作抗原，如TPPA、FTA-ABS、免疫层析梅毒螺旋体抗体快速检测、酶联免疫吸附法等，我院以TPPA和酶联免疫吸附法和快速胶乳法为代表。优点是特异性强，可作为梅毒螺旋体非特异性抗体初筛阳性标本的复检和确证[11]。但由于感染梅毒螺旋体后，特异性抗体试验呈阳性的患者长时间甚至终身阳性，不能区分既往和现症感染，亦不能作为疗效观察。另外TPPA存在成本高耗时长，不易自动化的缺点，胶乳法虽简单快速但是为手工方法，假阳性比例也较高。

针对方法学上的利弊，对于梅毒血清学筛查的方案各国不尽相同。美国CDC推荐首选非特异性抗体进行初筛，阳性后再使用特异性抗体方法进行确证[12，13]。 但是我们知道非特异性方法操作相对繁琐，消耗人力，不便大批量系统化测量，而且对于非活动性梅毒感染且不知道自己曾经感染梅毒的患者易造成“未曾感染梅毒”不必要的误会。目前我国很多医院采用逆向程序（reverse sequence）筛查方案[14，15]。即先查特异性抗体，再查非特异性抗体试验。这样可以明确的将既往感染和现症梅毒的情况告知患者和临床医师，也避免了一些不必要的纠纷。同时，对于梅毒特异性抗体的检测，很多都是上机的方法，节约人力同时标准化程度高，重复性好。

综上，我们对我院9169例进行筛查的患者进行了几种筛查方法的比较，并用TPPA法进行确证。综合分析，ELISA方法作为批量梅毒螺旋体抗体的初筛方法具有灵敏度、特异性高，可自动化的优点，其阳性结果经TPPA确证9518%为阳性。尤其是对于S/CO数值10以上的结果。当然也有特例，由表3我们发现一例患者S/CO数值高于15以上，但是经TPPA确证为阴性。这种情况很少见，联系临床医师并做了一系列检测后证实患者为自身免疫病患者，其体内自身抗体导致ELISA出现交叉反应，造成假阳性。该患者的胶乳法也为阴性。所以针对此情况ELISA和胶乳法双阳性的筛查标准可以避免假阳性的误报。同时，有我们的检测数据可知：对于ELISA方法和胶乳法双阳性的标本与TPPA检测结果一致性高达100%。由此针对TPPA 批量操作繁琐而且上机不方便的特点，我们可以应用酶联免疫法初筛阳性后用胶乳法复查，双阳性直接报梅毒螺旋体特异性抗体阳性。对于两者不一致的再做TPPA 检测，这样大大节约了时间和人力。同时RPR 的检测只对特异性抗体阳性患者检测[16]，用以区分是否有传染性。

为此，我们针对我院情况将梅毒螺旋体抗体检测流程规范如图1所示。

有关梅毒的检测我们力求更为准确及时，给患者和临床提供更为可靠的依据。在实践中我们也逐渐积累经验使各个检测环节更为完善，为梅毒的防治工作尽我们的微薄之力。图1梅素螺旋体抗体检测流程

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（收稿日期：2014-09-10）