PCR检验法在临床细菌检验中的应用

摘要：目的 探讨PCR检验法在临床细菌检验中的应用效果。方法 抽取本院近两年收集的细菌样本150份，均等划分为A组和B组，每组75份。采取不同的方法对两组细菌样本进行检验，A组采取细菌培养法，B组则采取PCR检验法。计算每组的阳性检出率并进行比较。结果 A组的阳性检出率为33.1%，B组的阳性检出率为79.3%，B组的阳性检出率明显高于A组（P<0.05）。结论 PCR检验法在临床细菌检验中有十分高的应用价值，不仅操作方便快捷、价格低廉，而且检出率高、准确可靠，如果广泛地应用于临床，一定会有很好的前景。

关键词：PCR检验法；细菌检验；应用效果

中图分类号：R473 文献标识码：A 文章编号：1672-3783（2018）02-0220-01

疾病的诊断与治疗离不开临床医学检验的高效性和准确率[1]，而细菌检验作为临床医学检验的重要部分，其检验结果对一些感染性疾病的诊断与治疗起着十分关键的作用。随着医疗技术的进步、医学理论的成熟，人们对诊断与治疗的要求越来越高，这也就对检验水平的提高做了潜在要求[2]。PCR检验法是一种把分子生物学应用于临床检验的方法，且近些年来PCR检验法在临床上的应用越来越广泛。笔者为了得到一些临床实践的指导，对PCR检验法在临床细菌检验中的应用效果做了一些探讨，大致的研究过程和结果如下文所述。

1 资料与方法

1.1 一般资料

抽取本院近两年收集的细菌样本150份，其中39份尿液样本、37份粪便样本、47份脓肿样本、27份血液样本。150份细菌样本都以严格的要求进行采集和送检，均等划分为A组和B组，每组75份。A组中有20份尿液样本、21份粪便样本、23份脓肿样本、11份血液样本；B组中有19份尿液样本、16份粪便样本、24份脓肿样本、16份血液样本。把两组细菌样本的一般资料进行比较，无明显差异（P>0.05），因此这次实验能够形成很好的对比。

1.2 检验方法

A组采取细菌培养法进行检验，具体操作为：把样本细菌接种于相应的培养基，粪便标本选择SS、麦康凯培养基，脓肿、尿液标本选择血平板，接种后置于温箱进行24小时的孵育培养；在血培养瓶中注入8～10毫升新采集的静脉血，进行标本培养时采用法国进口的Bact/ALERT 3D 60型血培养仪。待到阳性报警由仪器发出时，对细菌的生长曲线进行观察，把培养瓶中的培养液用无菌注射器抽取后直接涂于玻片进行革兰染色，镜检后报告结果。并且对抽取的培养液进行接种，选择麦康凯平板（35摄氏度）、血平板、巧克力平板5%CO2、35摄氏度进行18～24小时的培养至菌落形成，然后采用国外进口的微生物细菌鉴定仪对病原菌进行鉴定及药敏试验检验。

B组采取PCR检验法进行检验，应用ABBOTTm2000全自动核酸检测系统，把已置于生理盐水中的B组样本在每分钟1200转的离心速度下进行离心操作10分钟，去除上清液后加入碱性裂解液并且置于98摄氏度的环境中进行加热，然后开始第二次离心处理，使用PCR扩增仪对第二次离心后的上清液进行检测，并把其当做基因模板。循环参数的设置根据要求而定，操作过程中要严格遵守仪器和PCR检验试剂的使用说明书。

1.3 观察指标

统计并记录两种检验方法的阳性检出率，把两组的阳性检出率进行比较与分析。

1.4 统计学处理

应用SPSS24.0统计学工具统计分析实验所得到的数据，把计数资料进行2检验后发现P<0.05，表明两组之间的差异具有统计学意义。

2 结果

A组的阳性检出率为33.1%，B组的阳性检出率为79.3%，B组的阳性检出率明显高于A组（P<0.05），具体情况如下表所示：

3 讨论

细菌检验在临床医学检验中占有十分重要的地位[3]，对一些感染性疾病的诊断与治疗有着一定的指导作用。很长一段时间以来，细菌培养法一直是临床上细菌检验所采取的主要方法，此法虽然简便易行，但是由于各方面的制约导致阳性检出率较低，而且从标本采集到得出结果往往需要较长的时间（3～7天），很有可能延误疾病的诊断与治疗[4]。

PCR技术是运用分子生物学的原理，通过体外酶促扩增特定基因或者序列的技术，广泛应用于遗传鉴定、基因克隆、传染病病原分析等科学领域。近些年来，PCR检验法越来越多地应用于临床细菌检验，而且取得了十分显著的效果。运用PCR检验法对细菌进行检验时，关键的一步是针对所检验病菌的特异保守序列设计合适的引物，以保证PCR扩增的准确性。目前，PCR检验法的运用主要体现在两方面：（1）对某个病原的单个特异基因进行检验，可通过一次检验判断某种或者多种病菌是否存在；（2）对某个病原的多个基因进行检测，可有效避免假阳性结果的出现。有研究表明[5]，PCR检测法不仅能够检测出特定的基因序列，而且可以准确地检测出菌株染色体上的基因拷贝数。

随着科学技术的发展、学术理论的完善，各种新的检验技术和检验标准相继出现，不断对旧方法的缺点进行着弥补，但还是很难避免一些因素的制约，如昂贵的仪器价格、高的纯度要求等都一定程度上限制着一些检验方法的推广。PCR检验法由于其简便易行，灵敏精确、能够迅速出结果，而大大降低了检验的成本，受到广大临床工作者的欢迎。

经过以上的研究，发现PCR检验法在临床细菌检验中有十分高的应用价值，不仅操作方便快捷、价格低廉，而且检出率高、准确可靠，如果广泛地应用于临床，一定会有很好的前景。

参考文献

[1]黄乐安，邱丽阳.PCR检验法和细菌培养法在陰道细菌分析中的临床应用[J].医疗装备，2018，31（07）：40-41.

[2]张志锋，李俊.PCR产物酶联免疫检测法在临床检验中应用效果分析[J].中国农村卫生，2017（16）：41.

[3]李颖嫦，罗小娟，黄少珍.PCR检验法和细菌培养法在阴道细菌检验中的应用研究[J].现代诊断与治疗，2017，28（07）：1300- 1301.

[4]王冬梅.PCR检验法在细菌检验中的临床效果分析[J].中国现代药物应用，2016，10（13）：40-41.

[5]王传海.临床细菌检验中PCR检验法的准确性分析[J].中国卫生标准管理，2016，7（06）：150-152.