SurePath与Cytospin两种液基细胞学制片技术的比较研究

摘要：目的 比较SurePath和Cytospin两种液基细胞学制片技术的优缺点。方法 收集了2013年8月～2014年7月在彭州市妇幼保健院进行宫颈液基细胞学检测的6970例标本，其中2750例采用Cytospin制片，4220例采用SurePath制片，两组标本均采用TBS-2001判读标准进行质量评估和分类报告，并对报告结果进行统计学分析。结果 与Cytospin比较，SurePath的标本不满意率降低了86.16%，ASC-US+检出率提高了124.20%，LSIL+检出率提高了188.59%，HSIL+检出率提高了209.54%，差异有统计学意义。结论 与Cytospin比较，SurePath在多项技术性能中均表现出了明显的优势，为细胞学实验室提供了一套更好的制片方案。

关键词：宫颈液基细胞学；TBS；SurePath；Cytospin

Comparative Study of SurePath and Cytospin Two Kinds of Liquid-based Cytology Production Technology

CAI Yong-bin，LIU Ke-ming，LEI Ying，YIN Xian-ke

（MCH Hospital of Pengzhou City，Pengzhou 611930，Sichuan，China）

Abstract：Objective Comparing the advantages and disadvantages of SurePath and Cytospin two kinds of liquid-based cytology production technology.Methods 2013 August to 2014 July were collected 6970 specimens of cervical liquid-based cytology in the MCH Hospital of Pengzhou， of which 2750cases were treated with producer Cytospin， and 4220 cases were treated with SurePath production， two groups of specimens are used for interpretation of TBS-2001 standards for quality evaluation and classification of the report，and the results were statistically analyzed.Results Compared with Cytospin， the specimens unsatisfactory rate of SurePath is reduced by 86.16%，the detection rate of ASC-US+ increased by 124.20%，the detection rate of LSIL+ increased by 188.59%，the detection rate of HSIL+ increased by 209.54%，The difference was statistically significant.Conclusion Compared with Cytospin， SurePath in a number of technical performance showed obvious advantage，Provides a better production scheme for cytology laboratory.

Key words：Cervical liquid-based cytology； TBS；SurePath；Cytospin

液基细胞学（Liquid-based cytology）制片技术革新了标本采集和制片方法，极大的提高了细胞学实验室的制片质量。随着液基制片逐步替代传统巴氏涂片，市场上出现了大量不同类型的液基细胞学制片产品。采用不同的设备和方法其制片质量如何，尚需通过不断的临床实践来检验。

1资料与方法

1.1一般资料 收集了2013年8月～2014年7月在彭州市妇幼保健院进行宫颈液基细胞学检测的6970例标本。其中2013年8月～2014年1月的2750例标本使用Cytospin制片，2014年2月～7月的4220例标本使用SurePath制片。

1.2方法

1.2.1取样工具 Cytospin采用丹阳市东胜塑料制品有限公司生产的一次性宫颈细胞取样刷；SurePath采用荷兰Rovers Medical Devices公司生产的Rovers○R Cervex-Brush（宫颈细胞刷）。

1.2.2制片设备 Cytospin，又称为细胞离心涂片机，为湖北孝感阔海医疗科技有限公司的产品，由振荡器、过滤装置和离心甩片机组成；SurePath，又称为AutoCyte，为美国BD公司的产品，由振荡器、样本转移机（PrepMate○R）、离心机、制片染色机（PrepStain○R）和程控电脑组成。

1.2.3样本收集 Cytospin和SurePath均采用相同的样本收集方法：①用干棉球轻轻拭去宫颈外口的粘液及分泌物；②将宫颈取样刷刷头中间部较长的刷毛插入子宫颈管内，周边部刷毛顶端覆盖在宫颈外口处，柔和的向前抵住取样刷，保持一定的压力，顺时针同向旋转3～5 w；③在盛有保存液的瓶子里涮洗宫颈刷，然后下推或拔脱宫颈刷刷头，并将刷头刷尖向下浸泡于样本收集瓶的保存液内；④拧紧瓶盖，标记受检者姓名和识别信息。

1.2.4制片步骤 Cytospin：①振荡；②过滤；③标记载玻片，安装制片夹；④吸取2～4 ml细胞混悬液滴入对应的样本端口；⑤启动细胞离心涂片机（2000 r/min），离心1 min；⑥取片，并适当干燥（约30s）；⑦95%酒精固定（约30 min）；⑧染色；⑨脱水、透明并封固。SurePath：①振荡；②标注离心管，并加入4 ml密度梯度分离液；③运行PrepMate样本转移机，将样本转移至离心管；④离心机第一次离心（离心力200 g，时间2 min）；⑤用负压吸引器吸出离心管上层的血液、粘液及杂质；⑥第二次离心（离心力800 g，时间10 min）；⑦倒尽离心管液体，保留富集细胞团；⑧准备玻片架，安放沉降室；⑨安放离心管架、玻片架和染液管架；⑩运行PrepStain制片系统；○11取片，并脱水、透明及封固。

1.2.5染色方法 Cytospin和SurePath均采用巴氏染色。

1.2.6标本质量评估及结果判读 采用TBS-2001（The Bethesda system）判读标准对所有Cytospin和SurePath制片进行标本质量评估和分类报告。

1.2.7质量控制 全部"不满意"标本和"阳性"涂片需经过至少2名医生重复阅片，阴性涂片进入常规质控程序。

1.3统计学方法 统计学分析采用SPSS 19.0软件，率的比较使用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1 SurePath制片与Cytospin 制片的TBS报告结果比较，见表1。

2.2 SurePath制片与Cytospin制片的ASC-US+检出率、LSIL+检出率及HSIL+检出率比较，见表2。

3讨论

3.1自从20世纪40年代Papanicolaou医生开始用细胞学涂片诊断宫颈癌以来，全世界都用巴氏涂片进行宫颈癌筛查。Laara的研究显示，在筛查质量和覆盖面积较高的地区和国家，该方法可以减少浸润性宫颈癌的发病率达80%[1]。由于巴氏涂片简单易行，经济有效，该技术几乎被一成不变地沿用了将近5 0 年。20世纪80 年代末和90年代初， 大量发生在美国女性巴氏检查假阴性诊断的诉讼案引起了人们的关注。Frable等的报道显示，巴氏涂片的假阴性率至少为15%～20%[2]。直到20世纪90年代末，美国食品与药物管理局（FDA）相继批准了ThinPrep（新柏氏）及AutoCyte（现称为SurePath）两种液基细胞学制片产品应用于临床诊断。随着液基细胞学逐步替代传统巴氏涂片，市场上出现了大量各式各样的液基细胞学制片装置，根据制片原理的不同，大致可分为离心式制片、滤膜式制片和沉降式制片3种类型。

Cytospin是细胞离心涂片机的代名词，用于制作细胞学涂片已有40多年的历史，英国Shandon Cytospin是离心式制片技术的代表。赵华等的报道显示，与巴氏涂片比较，Shandon Cytospin制片的异常细胞检出率提高了3.5倍（269.23%）[3]。本项研究使用的湖北阔海Cytospin制片原理与Shandon Cytospin相同。其产品的优势是设备要求不高，耗材成本较低。局限性是未采用梯度离心细胞富集技术、细胞定量采集技术、自动染色技术和不可避免的空气干燥。空气干燥会导致细胞退变、微细结构消失、出现煎蛋样改变等人工假象，这是导致细胞学鉴别诊断困难最为常见的原因之一。

ThinPrep（新柏氏）是美国Hologic公司的产品，1996年通过美国FDA认证，是滤膜式制片技术的代表。Monsonego 等的多中心研究显示，与传统涂片比较，ThinPrep的标本不满意率增加了10.42%，HSIL检出率提高了58%，LSIL检出率提高了18%，ASCUS检出率提高29%[4]。印永祥等的报道显示，与传统涂片比较，ThinPrep的标本不满意率降低了31.57%，异常细胞检出率提高了204.05%[5]。

SurePath又称为AutoCyte，是美国BD公司的产品，1998年通过美国FDA认证，是沉降式制片技术的代表。其制片特点主要有：①密度梯度试剂与低速离心相结合，使标本混悬液分层；通过负压吸引器祛除离心管上层的血液、粘液及杂质等干扰制片的物质；然后再通过第二次离心富集上皮细胞用于制片。②玻片位于沉降室底部，定量吸取细胞混悬液加入预置了一层缓冲水的沉降室，利用重力作用，细胞自上而下飘落到玻片上，不但能够增加捕捉病变细胞的几率，而且最大限度地保护了细胞的自然形态。③每张涂片独立染色，染液一次性使用，既避免了标本的交叉污染，又保证了染色的一致性和可重复性。④每批次可自动制片并染色48张，制片效率非常高，特别适合大样本标本的批量化处理。

3.2细胞学报告的准确性与样本的采集、制片的质量以及医生的阅片经验密切相关。Frable等的报道显示，在传统巴氏涂片中，有高达53%～90%假阴性的原因是涂片中没有能诊断的细胞[2]。在样本采集环节，SurePath采用荷兰Rovers Medical Devices公司的Rovers？ Cervex-Brush，与普通宫颈细胞刷相比，其刷毛采用了专利外观及横切面设计，能够更加容易的采集到宫颈管移行区的上皮细胞，这是降低标本不满意率和提高异常细胞检出率的一个容易被忽视的因素。无论是ThinPrep、Cytospin，还是SurePath，在样本收集瓶里涮洗宫颈刷，尽量使细胞从刷子和粘液中脱落下来，这是取样时可以普遍采用的一项操作技巧。Bigras等的研究显示，将宫颈刷刷头放入样本保存瓶中，可以保证最佳的液基细胞学样本收集[6]。在制片环节，湖北阔海Cytospin使用了一种简便的内置式过滤装置，对粘液和杂质具有一定的分离作用。SurePath采用梯度离心细胞富集技术，能很好的分离血液、粘液和杂质。接触性出血既是宫颈癌前病变最常见的一种症状，又是导致标本制片不满意最常见的一种原因。Brenda等的研究显示，SurePath采用的细胞富集方法与ThinPrep的膜滤过方法相比，能处理的可能混杂血液量显著增加[7]，这也是SurePath的标本不满意率显著低于Cytospin制片的一个重要原因。Fremont-Simith等的多中心研究显示，与传统涂片比较，SurePath的标本不满意率降低了58.44%，HSIL检出率提高了64.44%，LSIL检出率提高了107.16%，ASC-US检出率提高了75.12%。本项研究显示，与Cytospin比较，SurePath的标本不满意率降低了86.16%（P<0.01）， ASC-US+检出率提高了124.20%（P<0.01），LSIL+检出率提高了188.59%（P<0.01），HSIL+检出率提高了209.54%（P<0.05），差异有统计学意义。

总之，制片质量受到样本的采集质量、设备的智能化程度以及制片人员的专业素质等多种因素的影响。与Cytospin比较，SurePath液基细胞学制片系统在多项技术性能中均表现出了明显的优势，为细胞学实验室提供了一套更好的制片方案。

参考文献：

[1]Laara E.Trends in mortality from cervical cancer in the Nordic countries：association with organized screening programmes[J].Lancet，2005，34（4）：247-249

[2]Frable WJ，Austin RM，Collins RJ，et al.Medicolegal affairs：IAC task force summary[J].Acta Cytol，1998，42（1）：76-119

[3]赵华，陆以农，陈萍倩，等.细胞离心涂片机制作液基细胞涂片在宫颈病变诊断中的可行性评估[J].实用医技杂志，2005，12（2）：284-285.

[4]Monsonego J，Autillo-Touati A，Bergeron C，et al.Liquid-based cytology for primary cervical cancer screening：a multi-centre study[J].Br J Cancer，2001，84（3）：360-366.

[5]印永祥，赵华，黄望珍.液基细胞学技术与传统细胞学涂片检测宫颈鳞状细胞病变的比较[J].中国妇幼保健，2012，27（8）：1234-1236.

[6]Bigras G，Rieder MA，Lambercy JM，et al.Keeping Collecting Device in liquid medium is mandatory to ensure optimized Liquid-based cervical cytologic sampling[J].Journal of Lower Genital Tract Disease，2003，7（3）：168-174.

[7]Brenda J.Sweeney，Zafarul Haq，James F.Happel，et al.Comparison of the effectiveness of two liquid-based Papanicolaou systems in the handling of adverse limiting factors，such as excessive blood[J].Cancer Cytopathology.2006，108（1）：27-31.

编辑/张燕