热毒宁注射液对巨细胞病毒性心肌炎小鼠IFN—γ及IL—6含量的影响

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摘要：目的 观察热毒宁注射液对病毒性心肌炎（VMC）小鼠血浆IFN-γ及IL-6含量的影响，探讨热毒宁注射液对病毒性心肌炎小鼠的抗炎保护作用。方法 40只雄性BALB/c小鼠随机分为4组：空白组（A组）、模型组（B组）、更昔洛韦注射液组（C组）、热毒宁注射液组（D组），每组10只。A组腹腔注射0.5ml生理盐水，连续注射10天；B、C、D各组首先腹腔注射巨细胞病毒（CMV）悬液0.1ml，0.5min后分别注射生理盐水、更昔洛韦注射液、热毒宁注射液各0.4ml，连续治疗10d；10d后采集血液，采用ELISA法检测血浆IFN-γ及IL-6含量。结果 与B组相比，C、D组小鼠的IFN-γ含量显著升高，IL-6含量明显降低（P<0.05），但C、D组相比无明显差别。结论 热毒宁注射液具有抗炎作用，对治疗病毒性心肌炎小鼠具有一定的疗效。

关键词：病毒性心肌炎；热毒宁注射液；IFN-γ；IL-6；小鼠

心肌炎主要是由病毒感染、化学物质损伤或自身免疫引起的心肌局灶性或弥漫性炎性病变。心内膜穿刺的病理检查结果表明，大约60%心肌炎患者的心肌细胞病毒检测为阳性[1]，这种因病毒感染心肌细胞而引起的心肌炎称为病毒性心肌炎。大约有20%病毒性心肌炎患者逐渐演变为扩张型心肌病，其致残致死率高[2]。能引发心肌炎的病毒较多，其中以柯萨奇病毒感染最为常见，CMV也是侵犯心肌的重要病毒之一。近年来，病毒性心肌炎患者发病率逐年上升，但具有明确疗效的治疗药物却为数不多。本课题研究了热毒宁注射液对巨细胞病毒性心肌炎小鼠的抗炎保护作用。

1资料与方法

1.1实验病毒、动物 巨细胞病毒由徐州医学院附属医院急诊实验室保存，40只6～8周龄雄性BALB/c健康小鼠，体重25g左右，购自徐州医学院实验动物中心。

1.2实验试剂、药物 IFN-γ及IL-6测定试剂盒均购自南京建成生物工程研究所，更昔洛韦注射液购自湖北科益药业有限公司，热毒宁注射液由连云港康缘药业有限公司生产。

1.3动物分组、取材 将40只6周龄雄性BALB/c健康小鼠随机分为4组：空白组（A组）、模型组（B组）、更昔洛韦注射液组（C组）、热毒宁注射液组（D组），每组10只。A组腹腔注射0.5ml生理盐水，连续注射10d；B、C、D各组首先腹腔注射10-4LogTCID50CMV悬液0.1ml[3]，0.5min后分别注射生理盐水、更昔洛韦注射液、热毒宁注射液各0.4ml，连续治疗10d； 10d后眼球摘除取血法采集血液约1.0ml，离心后，-20℃冰箱中保存，以检测IFN-γ及IL-6含量。

1.4 血浆IFN-γ及IL-6含量检测 按照IFN-γ及IL-6试剂盒说明书步骤进行操作，检测IFN-γ及IL-6含量。

1.5 统计学处理 计量资料以均数±标准差（x±s）表示，采用SPSS13.0软件处理数据。多组定量资料间的比较进行方差齐性检验，若方差齐采用单因素方差分析，若方差不齐采用Dunnett’s T3（3）检验。单因素方差分析中的两两比较采用SNK法检验，检验水准为α=0.05，P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

与模型组相比，热毒宁组、更昔洛韦组IFN-γ含量显著升高，IL-6含量明显降低（P<0.05），但热毒宁组与更昔洛韦组相比较无统计学意义（P<0.05）。见表1。

表1 血浆IFN-γ及IL-6的浓度，以均数标准差表示（pg/ml，x±s，n=10）

组别 IL-6 IFN-γ

A385.5±124.11567.2±121.6

B809.3±129.61016.8±112.5

C623.3±152.1b1276.8±175.3b

D615±112.4b1312±180.1b

注：与B组比较，bp<0.05。

3 讨论

心肌炎是一种弥漫性或局限性的心肌炎性病变，其详细发病机制尚不清楚，可能与病毒本身对心肌的直接损伤及其引起的免疫反应有关[4]，目前缺乏特效的病毒根治方法。热毒宁注射液是复方中草药注射剂，有效成分为青蒿、金银花、栀子，具有解热、抗病毒、抗细菌、增加免疫等药理作用。现代药理学研究表明，青蒿含倍半萜内酯、黄酮类、青蒿酮，具有抗病毒、解热、抗炎、抗氧化、镇痛等作用，同时还具有免疫抑制和细胞免疫促进作用。

IL-6是一种多效型细胞因子，可调节多种组织细胞的生长与分化[5]，不仅在机体的免疫反应、防御机能及造血调控中起重要作用，而且与临床诸多疾病的病理变化密切相关。在病毒感染的急性期，特别是病毒血症期，由于病毒成分的刺激和诱导，造成单核巨噬细胞为主的免疫活性细胞产生大量IL-6，并释放到血循环中，致血浆中IL-6含量显著升高[6]。IFN-γ由CD8+T细胞和某些CD4+T细胞产生，NK细胞亦可合成少量的IFN-γ[7]；这些细胞只有在免疫应答中受到抗原或丝裂原活化后才能分泌IFN-γ，IFN-γ不仅能调节IL-6的产生，还能与其相互协同。本研究结果显示，热毒宁注射液组小鼠IFN-γ含量升高，IL-6含量降低，但与更昔洛韦组无明显差别，表明热毒宁注射液具有抗炎作用，其可使病毒性心肌炎小鼠的IFN-γ含量升高，IL-6含量降低，抑制炎症反应。为临床热毒宁注射液治疗病毒性心肌炎提供了实验依据，但热毒宁注射液治疗病毒性心肌炎的具体作用靶点尚有待于进一步研究。

参考文献：

[1]Luo H ， Wong J ， Wong B .Protein degradation systems in viral myocarditis leading to dilated cardiomyopathy [J].Cardiovascular Research， 2010， 85（2）： 347-356.

[2]Olimulder MA， Van Es J， Galjee MA.The importance of cardiac MRI as a diagnostic tool in viral myocarditis induced cardiomyopathy[J].Netherlands Heart Journal， 2009， 17（12）： 481-486.

[3]WangYX， Da Cunba V， MartinMcNuhy B. Inhibition of Rho-kinase by fasudil attenuated Angiotensin II induced cardiac hypertrophy in apolipoprotein E deficient mice[J].Eur J Pharmacol， 2005， 512（223）：215-222.

[4]Shauer A， Gotsman I， Keren A， et al. Acute？viral？myocarditis： current concepts in diagnosis and treatment[J].Isr Med Assoc J，2013， 15（3）： 180-185.

[5]Briso EM， Dienz O， Rincon M. Cutting Edge： Soluble IL-6R Is Produced by IL-6R Ectodomain Shedding in Activated CD4 T Cells[J].J Immunol，2008，180：7102-7106.

[6]Laure K.Case， Mohamad Moussawi， Brian Roberts. Histamine H1 receptor signaling regulates effector T cell responses and susceptibility to coxsackievirus B3-induced myocarditis[J]. Cell Immunol，2012，272（2）：269-274.

[7]Sylwester AW， Mitchell BL，Edgar JB，eta1. Broadly targeted human cytomegalovirus specific CD4+T and CD8+T cells dominate the memory compartments of exposed subjects[J].J ExpMed，2005， 202（5）：673-685.

编辑/冯焱