鸭源鼠伤寒沙门氏菌的分离鉴定及致病性观察

摘要：从湖北省黄陂地区肉鸭养殖场送检病料中分离到2株疑似鸭沙门氏菌（Salmonella），经普通培养基培养、生化试验、PCR鉴定、药物敏感性试验，鉴定为鸭源鼠伤寒沙门氏菌，分别命名为HP-2和HP-3株。该菌对多种抗生素具有耐药性，用分离鉴定的沙门氏菌HP-2株感染小鼠，小鼠全部死亡。经皮下注射途径感染13日龄雏鸭，致病性试验结果显示，试验雏鸭死亡率达60%，引起纤维素性心包炎、纤维素性肝被膜炎和纤维素性肺炎，说明此株沙门氏菌具有强致病性。药物敏感性试验结果显示，沙门氏菌HP-2和HP-3株对氯洁霉素、万古霉素、麦迪霉素、氧哌嗪青霉素、苯唑青霉素有耐药性。

关键词：鸭；沙门氏菌（Salmonella）；分离鉴定；致病性

中图分类号：S834 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2014）02-0378-04

Identification and Pathogenicity of Salmonella typhimurium Isolated from Duckling

CAI Shuang-shuang1，YANG Xu2，ZHONG Xiao-li3，YANG Jun3，XIANG Yu3，GU Chang-qin3，

ZHANG Wan-po3，CHENG Guo-fu3，HU Xue-ying3

（1. Hubei Three Gorges Vocational and Technical College， Yichang 443000， Hubei， China；2. Animal Disease Prevention and Control Center in Enshi Prefecture of Hubei Province， Enshi 445000， Hubei， China；3. College of Veterinary Medicine， Huazhong Agricultural University， Wuhan 430070， China）

Abstract：Two suspected strains of Salmonella were isolated from the clinical samples of meat ducks belonging to a meat duck farm located in Huangpi District of Hubei province. By cultured on normal medium， biochemical test， PCR identification， animal regression， drug susceptibility test， the two strains were identified duck intestine as Salmonella typhimurium and named as HP-2 and HP-3. The two strains were resistant to multiple antibiotics. Mice were all dead after infected with the HP-2 strain. After subcutaneous infection of 13-days-old ducklings， it showed that the mortality could approach 60% and there were fibrinous pericarditis，fibrinous glissonitis and fibrinous pneumonia， indicating that the HP-2 strain was of serious pathogenicity. The results of drug susceptibility tests showed the HP-2 and HP-3 strains were resistant to clindamycin，vancomycin，mydecamycin，piperacillin and oxacillin.

Key words：duck； Salmonella； identification；pathogenicity

沙门氏菌（Salmonella）是一种重要的食源性细菌病病原，由于沙门氏菌存在着地域性、高发病率和大范围的食物污染性等特点，成为了世界公共卫生安全的关注重点[1]。人类多是由于接触或食用被污染的食物、水而感染沙门氏菌，而携带沙门氏菌的家禽的粪便、肉、蛋类等成为重要的污染源。相对鸡肉和鸡蛋而言，鸭肉因其低脂肪和高蛋白组成，更有利于沙门氏菌的生存[2]。鸭独特的生物学特性和生活习性往往使其成为隐性带菌者，从而更加重了沙门氏菌对人类的潜在危害，因此，对鸭沙门氏菌的研究具有重要意义。

沙门氏菌广泛存在于环境中，可通过消化道、生殖道、呼吸道等多种途径感染多种家禽、家畜，导致沙门氏菌病的暴发和流行[3，4]，对养殖业造成巨大经济损失。鸭沙门氏菌病的报道并不多见，本试验从临床疑似感染病鸭体内分离到2株鸭沙门氏菌，并以分离的鸭沙门氏菌感染小鼠和雏鸭，观察其致病性及致病特点，从而为鸭沙门氏菌病的诊断提供依据，有助于鸭沙门氏菌病的预防和控制。

1 材料与方法

1.1 试验动物

湖北省黄陂地区肉鸭养殖场送检疑似感染病鸭；1日龄樱桃谷雏鸭20羽，购自武汉市畜牧科学研究所；昆明小鼠20只，购自中国科学院武汉病毒研究所实验动物中心。

1.2 沙门氏菌的分离及初步鉴定

2 结果与分析

2.1 鸭沙门氏菌的分离及结果鉴定

细菌经37 ℃培养18～24 h，在TSA培养基上形成圆形、隆起、表面光滑湿润、直径大部分约1 mm、少部分2～3 mm的无色透明菌落。挑取菌落涂片做革兰氏染色镜检，可见细菌为革兰氏阴性短杆菌，无芽孢，单个或成双排列。病料中共分离到2株细菌，分别命名为HP-2和HP-3。

2.2 生化试验结果

生化试验结果显示分离的沙门氏菌HP-2和HP-3均对硫化氢、葡萄糖、山梨醇、枸橼酸盐、赖氨酸、鸟氨酸试验为阳性；尿素、葡萄糖酸盐、蛋白胨水、侧金盏花醇、棉子糖、苯丙氨酸、木糖试验为阴性。MR试验阳性，VP试验阴性。

2.3 药敏试验结果

对分离的沙门氏菌进行了药敏试验，此次鸭场分离的沙门氏菌对氯洁霉素、万古霉素、麦迪霉素、红霉素、氧哌嗪青霉素、苯唑青霉素、青霉素不敏感。而对氯霉素、痢特灵、复方新诺明、多年霉素B、奥复星、氟哌酸、美满霉素、强力霉素、四环素、新霉素、卡那霉素、庆大霉素、丁胺卡那霉素、菌必治、复达欣、头孢呋肟、先锋霉素Ⅵ、先锋霉素Ⅴ、先锋霉素Ⅳ、羧苄青霉素、氨苄青霉素敏感。

2.4 鸭沙门氏菌的16S rRNA 的 PCR鉴定结果

HP-2和HP-3两株细菌16S rRNA的PCR产物经过凝胶电泳后发现两株菌分别在750 bp处有特异性条带。将扩增到的沙门氏菌16S rRNA产物进行测序，并进行BLAST比对。该菌与肠道沙门氏菌肠道亚种鼠伤寒血清型（Acc： AP011957，FQ312003等）序列分别达到100%和99%相似性，表明2个菌属同源性较高。结合培养特征，确定该菌为鼠伤寒沙门氏菌，分别命名为HP-2和HP-3株。

2.5 鸭沙门氏菌对小鼠的致病性

试验组小鼠于接种后12 h内全部死亡，剖检各脏器无明显眼观病变，死亡小鼠体内分离到接种的沙门氏菌。

2.6 鸭沙门氏菌对雏鸭的致病性

2.6.1 试验雏鸭的发病情况及临床症状 雏鸭接种后1 d开始出现有精神沉郁，脚软喜卧，站立不稳的症状；有的病鸭出现下痢，粪便呈水样，肛门附近多有白色糊状物。接种1 d就有试验鸭死亡，共死亡6羽，死亡率达60%。

2.6.2 试验雏鸭的眼观病理变化 试验组雏鸭可见心包、腹膜增厚，心包液、腹水增多，纤维素性渗出，甚至导致脏器粘连；肝脏表面有一层黄白色的纤维素附着，且肝被膜与胸壁、心脏，腹膜发生粘连（图1）；胆囊充盈；脾脏肿大，表面暗红色网格状，布满白色斑块，呈花斑状（图2）；脑、胸腺、法氏囊、肾组织未见明显病变。对照组各器官组织无明显眼观病理变化。

2.6.3 试验雏鸭的组织病理变化 试验组雏鸭心外膜增厚，可见大量异嗜性粒细胞浸润，有纤维素性渗出，还可见肉芽肿结构（图3）出现；肝被膜增厚，呈浆液纤维素性渗出，肝组织有局灶性坏死，坏死处呈均质无结构状；血管周围间隙增宽，有炎性细胞浸润；肺脏被膜增厚，呈浆液纤维素性渗出，有大量异嗜性粒细胞浸润（图4），肺组织明显淤血，血管周围组织间隙增宽，血管周围有炎性细胞围绕；肾脏的肾小叶边缘可见大量异嗜性粒细胞浸润聚集（图5），间质有轻微出血。对照组雏鸭各器官组织未见明显组织病理变化。

3 小结与讨论

本试验自湖北省黄陂地区肉鸭养殖场送检病料中分离到2株疑似鸭沙门氏菌，经细菌培养、生化试验、PCR鉴定、药物敏感性试验，鉴定为鸭源鼠伤寒沙门氏菌，分别命名为HP-2和HP-3株。沙门氏菌有2 500多种血清型[5]，只有约10%分离自家禽。沙门氏菌的血清型分布具有地域性，而相同地区不同国家间的沙门氏菌血清型分布差别不大[6]。据报道鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌是分离率最多的血清型[4]。不同血清型沙门氏菌的致病性、感染宿主范围和对象不同，因此实验室以及诊疗机构对沙门氏菌血清型的鉴定对疾病的治疗尤为重要。

禽感染鼠伤寒沙门氏菌的许多病例有纤维素性肝周炎和心包炎，本试验分离的HP-2株人工感染雏鸭，感染雏鸭出现典型的心包炎和肝周炎的病变，表明该分离株的致病性强。在临床病理诊断上，易与鸭大肠杆菌病、鸭疫里默氏杆菌病、鸭链球菌病相混淆[7-9]，因此应做进一步的细菌分离鉴定进行确诊。

近年来，由于养殖人员在养殖过程中为了预防某些疾病或是获得短期治疗效果往往滥用抗生素，导致沙门氏菌的耐药现象越来越严重，甚至出现多重耐药现象。通过药敏试验发现此次分离到的2株沙门氏菌的药敏性略有不同，可能是由于不同地区用药不同而导致菌株药敏性的变化。但这2株菌整体上的耐药现象并不严重，对大多数药物都极为敏感。沙门氏菌在环境中广泛存在且存活时间长，可通过多种途径和方式感染多种畜禽及人类，对养殖业造成巨大损失，对环境造成严重污染，对人的健康造成严重危害，故对其药敏试验的研究有利于养殖场的正确用药，以及时快速地控制病情的蔓延和发展，将损失降到最低。从长远角度看，正确用药也是生物安全的一种表现。

参考文献：

[1] FREITAS C G，SANTANA P，SILVA P H，et al. PCR multiplex for detection of Salmonella Enteritidis，Typhi and Typhimurium and occurrence in poultry meat[J]. International Journal of Food Microbiology，2010，139（1-2）：15-22.

[2] ADZITEY F，RUSUL G，HUDA N. Prevalence and antibiotic resistance of Salmonella serovars in ducks，duck rearing and processing environments in Penang，Malaysia[J]. Food Research International，2011，45（2）：947-952.

[3] PARSONS S K， BULL C M，GORDON D M. Low prevalence of Salmonella enterica in Australian wildlife[J]. Environmental Microbiology Reports，2010，2（5）：657-659.

[4] SAIF Y M.禽病学[M]. 第十二版.苏敬良，高 福，索 勋，译.北京：中国农业出版社，2012.744-759.

[5] STEVE Y S，PENDRAK M L， ABELA-RIDDER B，et al. An overview of Salmonella typing public health perspectives[J]. Clinical and Applied Immunology Reviews，2003，4（3）：189-204.

[6] HENDRIKSEN R S，VIEIRA A R，KARLSMOSE S，et al.Global monitoring of Salmonella serovar distribution from the World Health Organization Global Foodborne Infections Network Country Data Bank： Results of quality assured laboratories from 2001 to 2007[J]. Foodborne Pathology Disease，2011，8（8）：887-900.

[7] 胡薛英，谷长勤，程国富，等.人工感染鸭疫里氏杆菌雏鸭的病理学变化[J].中国兽医科技，2004，34（3）：48-51.

[8] 蔡双双，张 红，徐朋朋，等.鸭源致病性大肠杆菌的分离鉴定及致病性观察[J].湖北农业科学，2011，50（1）：118-121.

[9] LI M X，GU C Q，ZHANG W P，et al. Isolation and characterization of Streptococcus gallolyticus subsp. Pasteurianus causing meningitis in ducklings[J]. Veterinary Microbiology，2013，162（2/4）：930-936.